| Compartilhe o registro |
|
Exportar este item:
Use este identificador para citar ou linkar para este item:
https://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/5355| Tipo do documento: | Dissertação |
| Título: | Desenvolvimento e implementação de um sistema para a detecção e quantificação absoluta de Mycobacterium tuberculosis usando o gene da proteína enoil redutase NADH-dependente (inhA) |
| Autor: | D’Oca, Adriano Amaral Montes  |
| Primeiro orientador: | Santos, Diógenes Santiago |
| Resumo: | A tuberculose é uma das principais causas de morte ao redor do mundo envolvendo um único agente infeccioso, o Mycobacterium tuberculosis. A severidade desta epidemia global é exacerbada pela co-infecção com o HIV, que alterou drasticamente a epidemiologia da mesma, causando um aumento na dinâmica de transmissão, morbidade e mortalidade dos infectados, e com o surgimento de cepas multi-resistentes a drogas. No Brasil, praticamente um milhão de pessoas está infectado. Com o avanço da genética e biologia molecular, diversos tipos de métodos laboratoriais vêm sendo utilizados para o rápido diagnóstico e estudo da patogenicidade de doenças infecciosas de diversos microorganismos. A disponibilidade de seqüências genômicas de um grande número de microrganismos patogênicos proverá uma melhor compreensão de sua genética evolutiva, virulência e interações com o hospedeiro. O presente estudo tratou da implementacão de um teste para deteccão e quantificação absoluta de Micobacterium sp. a partir do emprego da reação em cadeia da polimerase associada a fluorescência. Para tanto, o gene da enoil-ACP redutase NADHdependente (inhA) foi selecionado como gene identificador e primers e sonda marcada com fluoróforo (TaqMan®) foram desenhados. Padrões para quantificação absoluta foram produzidos a partir da clonagem da sequencia identificadora em plasmídios, sendo posteriormente empregados em ensaios para quantificacão de amostras de DNA isoladas de escarro de pacientes portadores de tuberculose e células de M. tuberculosis em cultura. Os resultados mostraram que o sistema utilizando a inhA como gene identificador nas condições implementadas foi capaz de amplificar de 106 a 101 células de M.tuberculosis em cultura. Comparativamente ao método da espectrofotometria, o ensaio em tempo real empregando o gene da inhA foi mais sensível, apresentando menor variação em número absolutos. Amostras de DNA (n=13) isoladas de escarro de pacientes portadores de tuberculose de ++ e +++ foram submetidas ao ensaio e foram postivamente detectadas com variação de três ordens de magnitude. Amostras de indivíduos controle saudáveis não apresentaram sinal positivo, atestando a especificidade do sistema. |
| Palavras-chave: | BIOLOGIA MOLECULAR TUBERCULOSE DIAGNÓSTICO REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE |
| Área(s) do CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL |
| Idioma: | por |
| País: | BR |
| Instituição: | Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul |
| Sigla da instituição: | PUCRS |
| Departamento: | Faculdade de Biociências |
| Programa: | Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular |
| Tipo de acesso: | Acesso Aberto |
| URI: | http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/5355 |
| Data de defesa: | 26-Ago-2009 |
| Aparece nas coleções: | Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular |
Arquivos associados a este item:
| Arquivo | Descrição | Tamanho | Formato | |
|---|---|---|---|---|
| 417689.pdf | Texto Completo | 436,17 kB | Adobe PDF |  Baixar/Abrir Pré-Visualizar |
Os itens no repositório estão protegidos por copyright, com todos os direitos reservados, salvo quando é indicado o contrário.