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Document type: Tese
Title: Avaliação da aplicação de uma solução experimental inibidora de metaloproteinase na resistência de união mediata de sistemas adesivos
Author: Melara, Rafael
Advisor: Burnett Junior, Luiz Henrique
Abstract (native): Este estudo teve por objetivo avaliar, in vitro, a resistência de união à microtração (RUM) mediata (12 meses) dos sistemas adesivos Adper Scotchbond SE / 3M/ESPE (Adper SE) e Adper Scotchbond Multi-Uso / 3M/ESPE (Adper SMP) à superfície dentinária sadia, tratada ou não com uma solução ácida experimental inibidora de metaloproteinases (MMPs), bem como o padrão predominante de falha por fractografia; e avaliar, in vitro, a inibição da atividade gelatinolítica por uma solução ácida experimental para condicionamento de superfície dentinária contendo tetraciclina em comparação com uma solução experimental contendo tetraciclina. Para avaliação da RUM mediata, nos grupos Adper SE Controle e Adper SMP Controle, o sistema adesivo foi aplicado de acordo com as instruções do fabricante. No grupo Adper SE Experimental foi aplicada a solução experimental previamente ao sistema adesivo, e no grupo Adper SMP Experimental, o condicionamento com ácido fosfórico a 37% foi substituído pela aplicação da solução experimental. Após a aplicação dos sistemas adesivos, os dentes foram preparados para o teste de RUM, e os palitos obtidos foram armazenados em estufa a 37oC. Após 12 meses, foi realizado o teste RUM e os palitos foram avaliados em MEV. Para avaliação da atividade enzimática, amostras salivares foram coletadas de doadores saudáveis, centrifugadas e o sobrenadante foi usado através da técnica zimográfica. Esta técnica baseou-se no uso da eletroforese, no qual um substrato proteico (gelatina) foi co-polimerizado com acrilamida. As enzimas foram separadas sob condições não redutoras, renaturadas e então incubadas em tampão adequado, baseando-se na associação entre digestão do substrato e verificação do peso molecular das proteases. Para quantificar a inibição relativa pelas duas soluções foi usado o programa Image J (NIH, Bethesda, MD, USA) e comparadas com o controle. Em relação à RUM mediata, de acordo com o teste de Tukey (α=0.05), não houve diferença entre os grupos controle e experimental para cada sistema adesivo. O padrão predominante de falha para o sistema adesivo Adper SE foi coesiva em resina composta enquanto que para o Adper SMP foi coesiva em camada híbrida. Na análise zimográfica, as enzimas foram caracterizadas como metaloproteinases da matriz, pois a sua expressão foi inibida pelo EDTA (um conhecido inibidor de MMPs), enquanto o NEM (um inibidor de proteases serinas) não teve nenhum efeito sobre a atividade enzimática. A MMP identificada no estudo, foi caracterizada como MMP-2, apresentando um peso molecular de 62KDa. A solução ácida experimental apresentou um percentual de inibição da atividade gelatinolítica de 93.66% (concentração de 0.05%) e de 58.58% (concentração de 0.01%), enquanto que a solução experimental teve um percentual de inibição de 31.28% e 6.83%, respectivamente. Com base nos resultados encontrados é possível concluir que após 12 meses de armazenagem, o sistema adesivo Adper SE mostrou desempenho superior ao Adper SMP no teste de RUM, parecendo também ser mais efetivo na manutenção da integridade da interface adesiva, sob análise fractográfica; e que a solução ácida experimental condicionadora de superfície dentinária foi capaz de inibir quase completamente a atividade enzimática da MMP-2, de uma maneira dose dependente.
Abstract (english): This study aimed to evaluate, in vitro, the mediate microtensile bond strength- μTBS (12 months) of adhesive systems Adper Scotchbond SE / 3M/ESPE (Adper SE) and Adper Scotchbond Multi-Purpose / 3M/ESPE (Adper SMP) to sound dentin surface, treated or not with an experimental acid solution inhibitor of metalloproteinases (MMPs), as well as the predominant pattern of failure by fractography; and evaluate, in vitro, the inhibition of gelatinolytic activity by an experimental acid solution for dentin surface etching containing tetracycline compared with an experimental solution containing tetracycline. For mediate μTBS evaluation, in Adper SE Control and Adper SMP Control groups, the adhesive system was applied according to the manufacturer's instructions. In Adper SE Experimental group was applied the experimental solution prior to the adhesive system, and in the Adper Experimental SMP group, the etching with 37% phosphoric acid was replaced by applying the experimental solution. After applying the adhesive systems, the teeth were prepared for μTBS test, and the sticks were stored in an oven at 37°C. After 12 months μTBS test was realized and the sticks were evaluated by SEM. For enzymatic activity evaluation, saliva samples were collected from healthy donors, centrifuged and the supernatant was used by technique of zymography. This technique was based on the use of electrophoresis, in which a protein substrate (gelatin) was co-polymerized with acrylamide. The enzymes were separated under non-reducing conditions, renatured and then incubated in suitable buffer, based on the association between the substrate digestion and verification of the molecular weight of proteases. To quantify the relative inhibition by the two solutions was used the Image J software (NIH, Bethesda, MD, USA) and compared with the control. For mediate μTBS evaluation, according to the Tukey test (α = 0.05), no difference between the control and experimental groups was found for each adhesive system. The predominant pattern of failure for the system Adper SE was cohesive in composite while for Adper SMP was cohesive in hybrid layer. In the enzymatic activity evaluation, the enzymes were characterized as matrix metalloproteinases, because its expression was inhibited by EDTA (a known inhibitor of MMPs), while NEM (an inhibitor of serine proteases) had no effect on enzymatic activity. The MMP identified in the study, was characterized as MMP-2, with a molecular weight of 62KDa. The experimental acid solution presented an inhibition of the gelatinolytic activity of 93.66% (concentration 0.05%) and 58.58% (0.01% concentration), while the experimental solution had a percentage inhibition of 31.28% and 6.83%, respectively. Based on these results we conclude that after 12 months of storage, the adhesive system Adper SE showed better performance that Adper SMP in the microtensile bond strength test, also seeming to be more effective in maintaining the integrity of the adhesive interface, under fractographic analysis; and that the experimental acid solution for dentin surface etching was capable of almost completely inhibits the enzymatic activity of MMP-2 in a dose dependent manner.
Keywords: ODONTOLOGIA
DENTÍSTICA
RESISTÊNCIA DOS MATERIAIS (ODONTOLOGIA)
ADESIVOS DENTÁRIOS
CNPQ Knowledge Areas: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::ODONTOLOGIA
Language: por
Country: BR
Publisher: Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul
Institution Acronym: PUCRS
Department: Faculdade de Odontologia
Program: Programa de Pós-Graduação em Odontologia
Citation: MELARA, Rafael. Avaliação da aplicação de uma solução experimental inibidora de metaloproteinase na resistência de união mediata de sistemas adesivos. 2013. 115 f. Tese (Doutorado em Odontologia) - Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, 2013.
Access type: Acesso Aberto
URI: http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/1200
Issue Date: 21-Mar-2013
Appears in Collections:Programa de Pós-Graduação em Odontologia

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