Otimização dos métodos de diagnóstico da esquistossomíase mansônica em áreas de baixa endemicidade

Exportar este item:

Use este identificador para citar ou linkar para este item: https://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/5412

Registro completo de metadados

Campo DC	Valor	Idioma
dc.creator	Teixeira, Candida Fagundes	-
dc.creator.Lattes	http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4734006A1	por
dc.contributor.advisor1	Graeff-teixeira, Carlos	-
dc.date.accessioned	2015-04-14T14:51:11Z	-
dc.date.available	2011-07-11	-
dc.date.issued	2011-03-22	-
dc.identifier.citation	TEIXEIRA, Candida Fagundes. Otimização dos métodos de diagnóstico da esquistossomíase mansônica em áreas de baixa endemicidade. 2011. 89 f. Tese (Doutorado em Biologia Celular e Molecular) - Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, 2011.	por
dc.identifier.uri	http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/5412	-
dc.description.resumo	Em focos de introdução recente da esquistossomíse, como Esteio na região metropolitana de Porto Alegre, a parasitose ocorre com baixas prevalências e cargas parasitárias, resultando em dificuldades para o diagnóstico parasitológico, em virtude da sensibilidade inadequada dos métodos clássicos. O principal objetivo deste trabalho foi otimizar o desempenho de métodos de diagnóstico, em situações que os ovos nas fezes são um evento raro. A estratégia foi examinar grandes quantidades de fezes, o que resultou na descrição e avaliação de um novo método de diagnóstico para detecção de ovos de Schistosoma mansoni nas fezes denominado Helmintex. Este é um método de concentração, onde as fezes passam por uma sequência de sedimentação espontânea, tamisagem, centrifugação com acetato de etila (Ritchie) e uma etapa final onde os ovos são isolados através de interação com partículas paramagnéticas em um campo magnético. Após a concentração, na etapa de detecção dos ovos todo o sedimento resultante é analisado através de microscopia óptica. Na segunda etapa deste trabalho o objetivo foi avaliar o desempenho da PCR em tempo real (tecnologia Taqman) como alternativa de método de detecção no sedimento final do Helmintex, substituindo a análise microscópica. Para realização da primeira etapa, ovos de S. mansoni foram adicionados em 30 g de fezes negativas para a infecção, formando suspensões de 0,1 a 1,34 ovos por grama de fezes (opg), e as fezes foram submetidas a todas as etapas de concentração do método. Para cada suspensão testada foi encontrado pelo menos 1 ovo em 20% (0.1 opg); 50% (0.24); 50% (0.34); 60% (0.67); 80% (1.0) e 100% (1.34) das tentativas testadas para cada suspensão. Para a avaliação do desempenho da PCR, "primers" e sonda para o gene da citocromo-C oxidase subunidade 1 foram desenhados para a amplificação do DNA de S. mansoni. Para a extração do DNA foram avaliados 4 protocolos diferentes. Foram preparadas suspensões de ovos em água destilada e fezes, contendo 1, 10, 20, 40 e 80 ovos. E amostras de 1000 ovos foram extraídas para a construção de uma curva padrão da estimativa de concentração de DNA, para verificação do limite de detecção da reação. A amplificação do DNA do parasito pode ser vista em todas as suspensões testadas, inclusive a que continha 1 ovo. Dos 4 protocolos de extração avaliados, o Illustra Tissue and Cell GenomicPrep Mini Spin Kit (GE Healthcare), um kit de extração comercial, foi o que apresentou o melhor rendimento. A curva padrão construída a partir de 1000 ovos apresentou um limite de detecção de 1 pg com reprodutibilidade de 13,8%. Considerando 100% de reprodutibilidade, a reação apresentou limite de detecção de 100 pg. O novo método Helmintex descrito neste trabalho representa grande avanço no diagnóstico da esquistossomíse em infecções com baixas cargas parasitárias, além disso, apresentam-se 2 opções de métodos de detecção (visualização microscópica e amplificação de DNA dos ovos pela PCR em tempo real). Estes avanços contribuem para o esforço em curso de reduzir mundialmente a morbidade e a disseminação das áreas de transmissão das esquistossomíases	por
dc.description.provenance	Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 432505.pdf: 1390397 bytes, checksum: 39fab4614d11925a0667ad6e40789290 (MD5) Previous issue date: 2011-03-22	eng
dc.format	application/pdf	por
dc.thumbnail.url	http://tede2.pucrs.br:80/tede2/retrieve/16412/432505.pdf.jpg	*
dc.language	por	por
dc.publisher	Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul	por
dc.publisher.department	Faculdade de Biociências	por
dc.publisher.country	BR	por
dc.publisher.initials	PUCRS	por
dc.publisher.program	Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular	por
dc.rights	Acesso Aberto	por
dc.subject	BIOLOGIA MOLECULAR	por
dc.subject	PARASITOS - DIAGNÓSTICO	por
dc.subject	PARASITOLOGIA	por
dc.subject	ESQUISTOSSOMOSE MANSÔNICA	por
dc.subject.cnpq	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL	por
dc.title	Otimização dos métodos de diagnóstico da esquistossomíase mansônica em áreas de baixa endemicidade	por
dc.type	Tese	por
Aparece nas coleções:	Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular

Arquivos associados a este item:

Arquivo	Descrição	Tamanho	Formato
432505.pdf	Texto Completo	1,36 MB	Adobe PDF	Baixar/Abrir Pré-Visualizar ×

Mostrar registro simples do item Recomendar este item Visualizar estatísticas

PUCRS

Biblioteca Digital de Teses e Dissertações