@MASTERSTHESIS{ 2020:939549382,
 	title = {Validação da enzima 5-enolpiruvilchiquimato-3-fosfato sintase (EPSP sintase) de Mycobacterium smegmatis como alvo molecular para desenvolvimento de novas moléculas antimicobacterianas},
 	year = {2020},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/9116",
 	abstract = "A importância epidemiológica das bactérias do gênero Mycobacterium é indiscutível e a necessidade de encontrar novas moléculas que possam inibir o seu crescimento é urgente. A via do chiquimato, necessária para a síntese de importantes metabolitos em bactérias, representa um alvo para inibidores do crescimento da Mycobacterium tuberculosis. O gene aroA codifica a enzima 5-enolpiruvilchiquimato-3-fosfato sintase (EPSPS) que catalisa a sexta etapa da via do chiquimato. Neste estudo, combinamos nocaute de genes, e ensaios cinéticos para avaliar a essencialidade do gene aroA e experimentos de silenciamento gênico para avaliar a vulnerabilidade de seu produto protéico, EPSPS synthase de Mycobacterium smegmatis (MsEPSPS), sob diferentes condições nutricionais. Demonstramos através de uma abordagem de nocaute gênico baseada na troca alélica, a essencialidade do MsEPSPS sob condições nutricionais ricas e pobres. Ao realizar experimentos de complementação gênica com o tipo selvagem (WT) e versões mutantes pontuais do gene aroA, juntamente com ensaios cinéticos usando WT e proteínas recombinantes mutantes, demonstramos que a essencialidade do gene aroA depende da atividade da MsEPSPS. Para avaliar a vulnerabilidade da MsEPSPS, realizamos experimentos de silenciamento genico usando o sistema Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats Interaction (CRISPRi). Os experimentos foram realizados tanto em meios ricos como definidos (pobres), usando três forças de repressão diferentes para o gene aroA. Apenas observamos um défice no crescimento quando as bactérias foram cultivadas em meios definidos sem suplementação de aminoácidos aromáticos, indicando assim que a vulnerabilidade do MsEPSPS depende das condições ambientais.",
 	publisher = {Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Escola de Ciências}
}