@PHDTHESIS{ 2021:227288222, title = {Análise da morfologia de superfície e propriedades mecânicas de células T24 de câncer de bexiga tratadas com quercetina}, year = {2021}, url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/9794", abstract = "As análises via microscopia de força atômica (do inglês: Atomic Force Microscopy - AFM) tornaram-se uma poderosa ferramenta para o estudo de células e tecidos. A possibilidade de extrair informações como elasticidade, rugosidade e morfologia de superfície em escala nanométrica, de maneira não destrutiva, tem chamado a atenção da comunidade cientifica. Em células de câncer, as informações mecânicas são um importante parâmetro indicador das funções básicas do tumor. As propriedades físicas de células cancerosas vêm sendo relacionadas às funções de aderência, diferenciação, invasividade e motilidade celular. Em nosso estudo analisamos a atividade anticâncer da quercetina através da avaliação das mudanças morfológicas das células de câncer de bexiga (T24), além de realizarmos ensaios preliminares, com células T24 em suas condições nativas, para a criação de um protocolo de preparação de amostras, adequado à obtenção de resultados mais fidedignos. Para isso, primeiramente, determinamos períodos críticos de cultura, e de espera pós-fixação, tendo em vista reduzir vieses relacionados ao protocolo. As análises foram divididas em duas partes: 1º - Determinar o tempo de manutenção em cultura celular no qual e possível observar a degradação de células T24 por AFM (12h, 24h e 48h em cultura). 2º - Demonstrar o impacto do tempo de espera para análise no microscópio após a fixação das células, em períodos de 0h, 12h, 24 e 48h. Nossos resultados demonstram que, a partir de 48h de manutenção em cultura celular, as células começam a sofrer mudanças morfológicas, diminuição da elasticidade e aumento da rugosidade. Em relação ao tempo de espera pós fixação, observamos tênues diferenças morfológicas a partir de 12h, contudo observa-se diminuição significativa da elasticidade seguida de aumento de rugosidade. Em 24h e 48h as alterações relacionadas a elasticidade e a rugosidade se mantém, porém observamos alterações drásticas na morfologia de superfície, como o colapso de membrana plasmática. Assim, os dados relativos à primeira parte do presente estudo demonstram a importância do estabelecimento de períodos críticos de cultura e de espera pósfixação, de modo a reduzir artefatos técnicos relacionados aos protocolos. Em um segundo momento e como objetivo principal do estudo, analisamos o efeito anticâncer da quercetina sobre células T24, através do AFM, avaliando as propriedades mecânicas e morfológicas das células. Nesse sentido, as células foram submetidas a doses de 40, 60 e 80 mM de quercetina, e analisadas por AFM 24 e 48 horas após o tratamento. Observamos que conforme aumentávamos a dose de quercetina, as células se tornavam significativamente mais rígidas e rugosas, indicando marcas biofísicas da ação anticâncer da quercetina sobre as células T24. Esses dados demonstram, pela primeira vez, as alterações mecânicas e morfológicas dos efeitos anticâncer da quercetina em células T24, analisadas por AFM.", publisher = {Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul}, scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular}, note = {Escola de Ciências} }