@MASTERSTHESIS{ 2020:1492376867,
 	title = {Valida??o da enzima 5-enolpiruvilchiquimato-3-fosfato sintase (EPSP sintase) de Mycobacterium smegmatis como alvo molecular para desenvolvimento de novas mol?culas antimicobacterianas},
 	year = {2020},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/9116",
 	abstract = "A import?ncia epidemiol?gica das bact?rias do g?nero Mycobacterium ? indiscut?vel e a necessidade de encontrar novas mol?culas que possam inibir o seu crescimento ? urgente. A via do chiquimato, necess?ria para a s?ntese de importantes metabolitos em bact?rias, representa um alvo para inibidores do crescimento da Mycobacterium tuberculosis. O gene aroA codifica a enzima 5-enolpiruvilchiquimato-3-fosfato sintase (EPSPS) que catalisa a sexta etapa da via do chiquimato. Neste estudo, combinamos nocaute de genes, e ensaios cin?ticos para avaliar a essencialidade do gene aroA e experimentos de silenciamento g?nico para avaliar a vulnerabilidade de seu produto prot?ico, EPSPS synthase de Mycobacterium smegmatis (MsEPSPS), sob diferentes condi??es nutricionais. Demonstramos atrav?s de uma abordagem de nocaute g?nico baseada na troca al?lica, a essencialidade do MsEPSPS sob condi??es nutricionais ricas e pobres. Ao realizar experimentos de complementa??o g?nica com o tipo selvagem (WT) e vers?es mutantes pontuais do gene aroA, juntamente com ensaios cin?ticos usando WT e prote?nas recombinantes mutantes, demonstramos que a essencialidade do gene aroA depende da atividade da MsEPSPS. Para avaliar a vulnerabilidade da MsEPSPS, realizamos experimentos de silenciamento genico usando o sistema Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats Interaction (CRISPRi). Os experimentos foram realizados tanto em meios ricos como definidos (pobres), usando tr?s for?as de repress?o diferentes para o gene aroA. Apenas observamos um d?fice no crescimento quando as bact?rias foram cultivadas em meios definidos sem suplementa??o de amino?cidos arom?ticos, indicando assim que a vulnerabilidade do MsEPSPS depende das condi??es ambientais.",
 	publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Escola de Ci?ncias}
}