@MASTERSTHESIS{ 2019:214723558,
 	title = {Determina??o de efeito de drogas antitumorais in vitro em diferentes estrat?gias de cultura celular},
 	year = {2019},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/8968",
 	abstract = "C?ncer ainda mata milh?es de pessoas a cada ano, se v? ent?o a import?ncia do desenvolvimento de novas terapias e de estrat?gias para melhorar a testagem de novas drogas. Assim, essas duas abordagens foram consideradas no desenvolvimento deste projeto. Primeiramente foi avaliado o potencial terap?utico de uma prote?na que inibe a prote?na de choque t?rmico Hsp70. A chaperona Hsp70 apresenta express?o elevada em tumores, onde pode agir promovendo-o; ela precisa, todavia, de outras prote?nas para que consiga exercer suas fun??es de chaperona. Uma dessas prote?nas ? a cochaperona Hsp70 Binding Protein-1 (HspBP1), que age inibindo a Hsp70. Experimentos preliminares de nosso grupo demonstraram que tumores que superexpressavam HspBP1 tinham seu crescimento reduzido in vivo. Assim, foi analisado o potencial antitumoral da HspBP1 em combina??o ou n?o com quimioter?picos. Para isso, diferentes linhagens celulares foram cultivadas in vitro e tratadas por 48 h, ap?s o qual foram avaliadas quanto a viabilidade (MTT), densidade celular (Microscopia ?ptica est?tica e ao longo das 48 h), morte celular (LDH) e apoptose (Anexina/PI). O tratamento de HspBP1 n?o teve a??o antitumoral significativa, mostrando que o tratamento in vitro dessa prote?na n?o foi nem citot?xico, nem citoest?tico, assim seu efeito in vivo deve ser indireto. Em rela??o a segunda parte, foi feita uma an?lise comparativa de diferentes modelos de cultivo in vitro tridimensionais (3D), visto que eles conseguem se aproximar mais do que ? visto in vivo. Assim, crescimento celular, morfologia, resposta a quimioterapia e express?o de RNA foram analisados em diferentes modelos de cultura. Os modelos utilizados foram: cl?ssico 2D; cultivo em gel feito a partir de um extrato tumoral (gel EHS, como Matrigel?); membrana eletrofiada; membrana produzida por Solvent Casting Particle Leaching (SCPL); e por fim, tumor in vivo. Os arcabou?os para cultivo 3D foram analisados por Microscopia Eletr?nica de Varredura (MEV) em rela??o a tamanho de poro. Foi visto que o gel apresentava o menor tamanho de poro, seguido pela membrana eletrofiada e por fim pela SCPL. C?lulas de melanoma B16F10GFP foram cultivadas por 7 dias in vitro e 10 dias in vivo, ap?s o qual foi feita analise por MEV. Como esperado, c?lulas crescidas em lam?nula de vidro apresentaram morfologia achatada e alongada, enquanto aquelas em 3D eram mais variadas, incluindo forma??o de agregados celulares e de esferoides. Essa morfologia encontrada nos modelos 3D se assemelhou mais aquelas in vivo. Para analisar resist?ncia a quimioterapia, ap?s os 7 dias em cultura amostras foram tratadas por 48 h com cisplatina, seguida de an?lise de viabilidade por MTT. No geral, foi poss?vel ver uma tend?ncia a resist?ncia nos modelos 3D, por?m apenas c?lulas na membrana eletrofiada apresentaram resist?ncia significativa ao tratamento. Por fim, an?lise de RNA mostrou similaridades entre os modelos de cultivo 3D, confirmando dados morfol?gicos. Dessa forma, o cultivo celular em qualquer um dos modelos 3D testados foi capaz de se aproximar mais a um tumor in vivo, mostrando que alternativas sint?ticas t?m o potencial de reduzir o uso de modelos derivados de animais para cultivo 3D.",
 	publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Escola de Ci?ncias}
}