@MASTERSTHESIS{ 2017:1560100634,
 	title = {Caracteriza??o bioqu?mica da enzima Adenilosuccinato liase de Leishmania (Viannia) braziliensis visando o planejamento racional de f?rmacos antileishmanioses},
 	year = {2017},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/7755",
 	abstract = "A enzima Adenilosuccinato liase (ASL) pertence a superfam?lia de enzimas aspartase/fumarase, as quais compartilham o mecanismo catal?tico ?cido-b?sico com ?-elimina??o de fumarato como o produto comum. A ASL est? envolvida tanto na bioss?ntese de novo quanto na via de salvamento de purinas. Aqui s?o descritos os m?todos de clonagem, express?o e obten??o da prote?na recombinante ASL de Leishmania braziliensis (LbASL) na sua forma homog?nea. An?lises da prote?na recombinante por espectrometria de massa, determina??o do estado oligom?rico e alinhamento m?ltiplo de sequ?ncias tamb?m s?o apresentados. Ensaios de cin?tica em estado estacion?rio mostraram que a LbASL segue o perfil de Michaelis-Menten. Experimentos de titula??o isot?rmica por calorimetria sugerem que a LbASL segue um mecanismo cin?tico Uni-Bi ordenado, no qual o fumarato ? liberado primeiro do s?tio ativo seguido pelo AMP. Dados de velocidade iniciais para a rea??o reversa e a rela??o de Haldane permitiram calcular uma constante de equil?brio desfavor?vel para a rea??o qu?mica catalisada pela enzima. Os par?metros de energia de ativa??o e termodin?mica tamb?m foram estimados. Os efeitos isot?picos do solvente V/K e V sugerem uma modesta contribui??o da transfer?ncia de pr?tons do solvente durante o passo limitante da rea??o. Os dados obtidos no invent?rio de pr?tons mostram um modesto efeito em V resultante de um ?nico s?tio prot?nico, e o valor de transi??o do fator de estado de fracionamento de 0,74 sugere a participa??o da transfer?ncia de pr?tons do solvente em vibra??es de estado de transi??o perpendiculares ? coordenada da rea??o. Experimentos de perfil de pH para kcat e kcat/KM sugerem os res?duos de amino?cidos envolvidos, respectivamente, na cat?lise e liga??o do substrato. A modelagem molecular para LbASL foi realizada visando prover uma base estrutural para interpreta??o dos dados experimentais. Um melhor entendimento do modo de a??o da LbASL ser? ?til para o desenho racional de agentes antileishmanioses.",
 	publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Faculdade de Bioci?ncias}
}