@PHDTHESIS{ 2017:1623615792, title = {Caracteriza??o de uma prote?na rica em glicinas e da paramiosina do carrapato Rhipicephalus microplus}, year = {2017}, url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/7707", abstract = "O Rhipicephalus microplus ? um carrapato que infesta preferencialmente bovinos, causando um grande preju?zo ? pecu?ria. O principal m?todo de controle ? o uso de acaricidas, os quais selecionam popula??es resistentes, al?m de aumentar o custo e o risco de contamina??o da carne, do leite e do ambiente. Desta forma, ant?genos vacinais t?m sido identificados e caracterizados como alternativa aos acaricidas. Mol?culas salivares de parasitos hemat?fagos podem inibir respostas associadas ? homeostase e modular o sistema imune do hospedeiro e, portanto, s?o op??es na busca por vacinas anti-carrapato. Neste contexto, este trabalho caracterizou uma prote?na rica em glicinas e a paramiosina do R. microplus. Prote?nas ricas em glicinas s?o secretadas na saliva e s?o essenciais na fixa??o e na alimenta??o do parasito. J? a paramiosina ? capaz de evadir o sistema imune do hospedeiro e mostrou-se um importante alergeno em ?caros e ant?geno vacinal contra helmintos. As sequ?ncias de cDNA e amino?cidos da prote?na rica em glicinas de R. microplus (RmPRG) foram identificadas e analisadas, revelando duas por??es distintas da prote?na (com glicinas isoladas ao longo da regi?o N-terminal e padr?es repetidos contendo glicinas ao longo da regi?o C-terminal). A clonagem, express?o e purifica??o da RmGRP foram realizadas e a prote?na recombinante foi testada quanto ao reconhecimento por soros de bovinos naturalmente e experimentalmente infestados, indicando a sua antigenicidade, mas tamb?m uma alta heterogeneidade no reconhecimento da prote?na entre indiv?duos e entre infesta??es no mesmo indiv?duo. Al?m disso, a RmGRP recombinante foi reconhecida pelos soros de coelhos imunizados com saliva e gl?ndula salivar de f?meas parcialmente e totalmente ingurgitadas e ovos, mas n?o por soros de coelhos imunizados com intestino. A express?o do gene codificante para a RmGRP (rmgrp) em diferentes tecidos de f?meas e fases do desenvolvimento do carrapato foi avaliada por qRT-PCR. A transcri??o do gene foi encontrada em ovos, larvas, machos adultos, al?m de gl?ndulas salivares, corpos gordurosos e ov?rios de f?meas parcialmente e totalmente ingurgitadas, apresentando os maiores n?veis de express?o nas larvas de 1 dia e nas gl?ndulas salivares de f?meas totalmente ingurgitadas. rmgrp n?o foi expresso nos ovos de 3 e 6 dias e no intestino de f?meas parcialmente e totalmente ingurgitadas, corroborando o resultado anterior. Ainda foram avaliados os efeitos do silenciamento do RNAm correspondente ? RmGRP e ? RmPRM, o que resultou na redu??o da taxa de postura de ovos no grupo em que o gene da RmPRM foi silenciado e da eclos?o de larvas em f?meas tratadas nos dois grupos. Portanto, sugere-se que as duas prote?nas s?o importantes durante o desenvolvimento larval, mas s? a RmPRM seja necess?ria na forma??o e/ou postura dos ovos. Tamb?m foi realizada a 8 clonagem da regi?o codificante e express?o dos fragmentos N-terminal, interno e C-terminal da paramiosina de R. microplus (RmPRM) em E. coli e da RmPRM completa em P. pastoris, sendo confirmadas por SDS-PAGE e western-blot. A partir dos dados obtidos, ambas RmGRP e RmPRM apresentam caracter?sticas que fazem delas poss?veis candidatas a comporem uma vacina coquetel contra o R. microplus.", publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular}, note = {Faculdade de Bioci?ncias} }