@PHDTHESIS{ 2017:1811121329,
 	title = {Avalia??o do fen?tipo de persist?ncia em isolados nasocomiais de Acinetobacter calcoaceticus-baumannii},
 	year = {2017},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/7566",
 	abstract = "Os pat?genos pertencentes ao complexo Acinetobacter calcoaceticus-baumannii (ACB)
 s?o considerados oportunistas e emergentes, respons?veis por ocasionar diversas
 enfermidades, acometendo principalmente pacientes imunocomprometidos e internados
 em unidades de tratamento intensivo. As op??es terap?uticas para o tratamento de
 infec??es ocasionadas por estes pat?genos s?o restritas, uma vez que estes apresentam
 frequentemente resist?ncia ? maioria dos antimicrobianos. Al?m disso, essas bact?rias
 podem ainda formar c?lulas persisters, que constituem uma pequena popula??o de
 c?lulas suscet?veis capazes de tolerar concentra??es letais de antimicrobianos
 bactericidas e outros agentes estressores. Este fen?tipo est? associado a falhas na terapia
 antimicrobiana, especialmente nas infec??es cr?nicas e recorrentes. Desta forma, o
 objetivo deste trabalho foi avaliar a presen?a de c?lulas persisters formadas por isolados
 do complexo ACB frente ? exposi??o ao meropenem e/ou ? polimixina B, na condi??o
 de biofilme e em cultivo planct?nico, assim como analisar estas c?lulas
 morfologicamente e identificar padr?es de express?o de prote?nas que pudessem estar
 envolvidos na forma??o e manuten??o da persist?ncia. Para tanto, 20 isolados cl?nicos
 foram caracterizados quanto ? capacidade em formar biofilme em superf?cie de
 poliestireno, e ? suscetibilidade ao meropenem e ? polimixina B, que foi avaliada por
 meio da determina??o da Concentra??o Inibit?ria M?nima (CIM) a estes f?rmacos.
 Todos os isolados foram submetidos ? exposi??o ao meropenem em diferentes
 concentra??es acima da CIM, enquanto que cinco foram expostos ? polimixina B para a
 avalia??o da presen?a de c?lulas persisters. Para todos os experimentos, a fim de
 estimar a fra??o de c?lulas remanescentes, al?quotas foram removidas em tempos
 determinados, efetuando-se dilui??es decimais seriadas e semeadura pela t?cnica da
 gota em ?gar nutriente. C?lulas persisters, em diferentes fra??es, foram encontradas nos
 cultivos de todos os isolados, tanto em biofilmes como na condi??o planct?nica, ap?s a
 exposi??o por 48 h ao meropenem e ? polimixina B, sendo as fra??es mais elevadas
 encontradas na condi??o de biofilme para ambos os antimicrobianos. As diferentes
 concentra??es de meropenem avaliadas n?o influenciaram os n?veis de c?lulas
 persisters; entretanto, frente ? exposi??o ? polimixina B, a fra??o de c?lulas mostrou-se
 dependente da concentra??o empregada. Ap?s exposi??o ? polimixina B por 24 h, foi
 observada retomada de crescimento das c?lulas sobreviventes, que foram avaliadas
 novamente quanto ? suscetibilidade a este antimicrobiano, mantendo-se suscet?veis com CIM de 1 ?g/mL, bem como foi verificada a integridade do antimicrobiano no
 sobrenadante destes cultivos por ensaios cromatogr?ficos, demonstrando que o mesmo
 n?o sofre degrada??o ap?s 48 h de exposi??o. Entretanto, quando se associou
 meropenem ? polimixina B em diferentes concentra??es, al?m de n?o ter sido observada
 a retomada de crescimento das c?lulas remanescentes, ocorreu a erradica??o das c?lulas
 persisters de um isolado de A. baumannii (Acb-1) cultivado em fase exponencial tardia.
 Al?m disso, a t?cnica de Nano-Cromatografia L?quida acoplada ? Espectrometria de
 Massas em Tandem foi empregada para a identifica??o e quantifica??o relativa de
 prote?nas possivelmente associadas ? persist?ncia em A. baumannii, ap?s a exposi??o ao
 meropenem. Diferentes padr?es de express?o foram identificados entre as c?lulas
 persisters presentes em cultivo planct?nico e em biofilme, sugerindo que a regula??o da
 persist?ncia possa ser realizada por mecanismos diferentes. Observou-se express?o
 aumentada de prote?nas envolvidas nos processos de divis?o celular e replica??o de
 DNA, especialmente no cultivo planct?nico, em concord?ncia com a presen?a de
 divis?o celular observada nas imagens obtidas a partir da microscopia eletr?nica de
 varredura nesta condi??o de cultivo. O aumento de express?o da glicose desidrogenase
 (GDH), NADH desidrogenase (NDH-1), succinato desidrogenase e ATP sintase
 indicam a transfer?ncia de el?trons a partir da rea??o catalisada por GDH para a cadeia
 de transporte de el?trons como uma poss?vel fonte de energ?tica para as persisters,
 corroborando a observa??o da presen?a de divis?o celular observada no cultivo
 planct?nico. Em contraste, prote?nas envolvidas no metabolismo de amino?cidos, bem
 como os principais fatores de elonga??o apresentaram express?o diminu?da em c?lulas
 persisters de Acb-1, sugerindo que a s?ntese proteica esteja reduzida, mesmo que muitas
 prote?nas tenham sido identificadas com express?o aumentada. Muitas prote?nas
 relacionadas ? membrana apresentaram a sua express?o aumentada, indicando poss?veis
 altera??es em sua composi??o e fun??o, embora prote?nas relacionadas ao metabolismo
 de lip?deos tenham apresentado express?o diminu?da. A an?lise prote?mica das c?lulas
 persisters, sobretudo, mostrou que estas c?lulas podem ser fisiologicamente distintas
 quando cultivadas em condi??es diferentes, bem como ao longo do tempo em uma
 mesma condi??o. Desta forma, considerando os distintos comportamentos do Acb-1
 quando exposto isoladamente ao meropenem ou ? polimixina B, bem como quando
 exposto a estes f?rmacos ao mesmo tempo, pode-se concluir que cada antimicrobiano
 pode ter atuado como um diferente estressor, possivelmente, levando a e/ou selecionando mecanismos de toler?ncia diferentes entre as persisters, o que possibilitou
 a sua erradica??o quando os f?rmacos foram combinados.",
 	publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Faculdade de Bioci?ncias}
}