@PHDTHESIS{ 2017:355833068,
 	title = {Validação da enzima di-hidroneopterina aldolase (EC 4.1.2.25) de Mycobacterium tuberculosis como alvo molecular para o desenvolvimento de fármacos antituberculose},
 	year = {2017},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/7420",
 	abstract = "A tuberculose (TB) tornou-se a principal causa mundial de morte por doenças infecciosas. Em
 2015, de acordo com a OMS, surgiram 10,4 milhões de novos casos de tuberculose no mundo.
 Atualmente os tratamentos comumente utilizados não são eficientes contra as formas da doença
 resistentes aos fármacos anti-TB mais eficazes, sendo necessários fármacos com novos
 mecanismos de ação. A di-hidroneopterina aldolase de Mycobacterium tuberculosis
 (MtDHNA/FolB) é uma enzima da via do folato, codificada pelo gene folB, que apresenta
 características importantes que a tornam um potencial alvo para síntese de novos agentes
 antimicrobianos. Neste estudo, por meio de mutagênese sítio-direcionada, análises bioquímicas
 e experimentos de nocaute gênico, demostramos que o gene folB é essencial para a
 sobrevivência de Mtb, e além disso provamos que essa essencialidade depende das atividades
 de aldolase/epimerase da proteína MtFolB. O gene do tipo selvagem (wt) e os mutantes pontuais
 K99A e Y54F foram clonados e expressos, e as proteínas recombinantes correspondentes foram
 purificadas e monitoradas para as atividades de aldolase, epimerase e oxigenase utilizando
 HPLC. Em contraste com a enzima MtFolB selvagem (wt), ambas as mutantes não
 apresentaram atividade de aldolase nem de epimerase nas condições testadas. A mutante Y54F
 manteve a atividade da oxigenase, enquanto que para a mutante K99A foi possível detectar a
 atividade de oxigenase apenas na presença de HP e GA como substratos. Os experimentos de
 nocaute mostraram que o gene folB é essencial para a sobrevivência de Mtb sob as condições
 testadas. Entretanto, diferentemente da cópia selvagem, quando as sequências que codificam os
 mutantes K99A ou Y54F foram utilizadas para complementação, não foram obtidas colônias
 viáveis, indicando que estes mutantes pontuais não poderiam resgatar as células após o nocaute
 do gene folB. Esses resultados indicam que as atividades de aldolase e/ou epimerase são cruciais
 para a sobrevivência de Mtb. A construção de cepas com fusão folB-GFP de Mycobacterium
 tuberculosis (Mtb) que contêm a sequência do tipo selvagem do gene folB ou um mutante com
 o C-terminal deletado (folBΔC), desprovida da sequência supostamente necessária para a
 ancoragem da enzima dentro dos compartimentos de nanocargas, foram realizadas e juntamente
 com outros métodos de biologia celular descritos neste trabalho também poderão ser utilizados
 para um melhor entendimento das funções celulares apresentadas por MtDHNA/FolB e para
 validação dessa enzima como potencial alvo terapêutico.",
 	publisher = {Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Faculdade de Biociências}
}