@PHDTHESIS{ 2017:2100911990,
 	title = {Valida??o da enzima di-hidroneopterina aldolase (EC 4.1.2.25) de Mycobacterium tuberculosis como alvo molecular para o desenvolvimento de f?rmacos antituberculose},
 	year = {2017},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/7420",
 	abstract = "A tuberculose (TB) tornou-se a principal causa mundial de morte por doen?as infecciosas. Em
 2015, de acordo com a OMS, surgiram 10,4 milh?es de novos casos de tuberculose no mundo.
 Atualmente os tratamentos comumente utilizados n?o s?o eficientes contra as formas da doen?a
 resistentes aos f?rmacos anti-TB mais eficazes, sendo necess?rios f?rmacos com novos
 mecanismos de a??o. A di-hidroneopterina aldolase de Mycobacterium tuberculosis
 (MtDHNA/FolB) ? uma enzima da via do folato, codificada pelo gene folB, que apresenta
 caracter?sticas importantes que a tornam um potencial alvo para s?ntese de novos agentes
 antimicrobianos. Neste estudo, por meio de mutag?nese s?tio-direcionada, an?lises bioqu?micas
 e experimentos de nocaute g?nico, demostramos que o gene folB ? essencial para a
 sobreviv?ncia de Mtb, e al?m disso provamos que essa essencialidade depende das atividades
 de aldolase/epimerase da prote?na MtFolB. O gene do tipo selvagem (wt) e os mutantes pontuais
 K99A e Y54F foram clonados e expressos, e as prote?nas recombinantes correspondentes foram
 purificadas e monitoradas para as atividades de aldolase, epimerase e oxigenase utilizando
 HPLC. Em contraste com a enzima MtFolB selvagem (wt), ambas as mutantes n?o
 apresentaram atividade de aldolase nem de epimerase nas condi??es testadas. A mutante Y54F
 manteve a atividade da oxigenase, enquanto que para a mutante K99A foi poss?vel detectar a
 atividade de oxigenase apenas na presen?a de HP e GA como substratos. Os experimentos de
 nocaute mostraram que o gene folB ? essencial para a sobreviv?ncia de Mtb sob as condi??es
 testadas. Entretanto, diferentemente da c?pia selvagem, quando as sequ?ncias que codificam os
 mutantes K99A ou Y54F foram utilizadas para complementa??o, n?o foram obtidas col?nias
 vi?veis, indicando que estes mutantes pontuais n?o poderiam resgatar as c?lulas ap?s o nocaute
 do gene folB. Esses resultados indicam que as atividades de aldolase e/ou epimerase s?o cruciais
 para a sobreviv?ncia de Mtb. A constru??o de cepas com fus?o folB-GFP de Mycobacterium
 tuberculosis (Mtb) que cont?m a sequ?ncia do tipo selvagem do gene folB ou um mutante com
 o C-terminal deletado (folB?C), desprovida da sequ?ncia supostamente necess?ria para a
 ancoragem da enzima dentro dos compartimentos de nanocargas, foram realizadas e juntamente
 com outros m?todos de biologia celular descritos neste trabalho tamb?m poder?o ser utilizados
 para um melhor entendimento das fun??es celulares apresentadas por MtDHNA/FolB e para
 valida??o dessa enzima como potencial alvo terap?utico.",
 	publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Faculdade de Bioci?ncias}
}