@MASTERSTHESIS{ 2016:1909521808,
 	title = {Estudo do papel da ecto-5'-nucleotidase no contexto da inflama??o avaliando par?metros citol?gicos, bioqu?micos, moleculares e imagens de ?PET/CT em Zebrafish},
 	year = {2016},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/6927",
 	abstract = "O mecanismo de a??o do LPS ainda n?o ? completamente elucidado em vertebrados como os peixes, e se diferencia dos vertebrados superiores. Em zebrafish, o LPS ? capaz de aumentar o recrutamento de c?lulas imunes e a express?o de genes relacionados com a resposta imune. O sistema purin?rgico tem uma grande rela??o com a regula??o do sistema imune e as respostas inflamat?rias. O ATP ? um nucleot?deo importante na secre??o de citocinas e no recrutamento e diferencia??o de c?lulas imunes, podendo ser sequencialmente desfosforilado gerando adenosina. No contexto da inflama??o, a adenosina atua como uma mol?cula imunomodulat?ria inata. Participam do controle dos n?veis extracelulares da adenosina, os transportadores de nucleos?deos e a ecto-5?-nucleotidase. A ecto-5?-nucleotidase ? uma enzima com papel de marcapasso na produ??o de adenosina e constitui um dos focos do presente estudo. Considerando a contribui??o da abordagem de an?lise de imagens no contexto do estudo da inflama??o, ? sabido que a capta??o do radiof?rmaco 18F-FDG, um an?logo da glicoseest? aumentada em roedores submetidos ? inflama??o, o que gera uma imagem diferenciada. O micro Tom?grafo por Emiss?o de P?sitron/Tomografia Computadorizada (?PET/CT) ? utilizado para pesquisas em animais de pequeno porte e obt?m imagens utilizando um radiof?rmaco. O uso da ?PET/CT contribui com informa??es a n?vel molecular, funcional e estrutural em tempo real e permite acompanhar o efeito de f?rmacos em situa??es fisiol?gicas/patol?gicas na escala de um animal diminuto como o zebrafish. A tecnologia do ?PET/CT ? relativamente nova e at? o momento n?o existem estudos cient?ficos publicados aplicando radiof?rmacos em zebrafish. Neste contexto, o objetivo do projeto foi estudar o envolvimento da enzima ecto-5?-nucleotidase no desenvolvimento de inflama??o induzida por LPS utilizando-se de par?metros citol?gicos, bioqu?micos, moleculares e de imagem por ?PET em diferentes tecidos de zebrafish adulto (Danio rerio). Para induzir inflama??o no zebrafish, os animais foram injetados com uma solu??o de LPS (10 ?g/g de peso corporal; i.p) ap?s terem sido submetidos ? anestesia (trica?na 0.1 g/L). Os animais permaneceram por 2 h ou 24 h neste tratamento. Para confirma??o da inflama??o foram analisadas a express?o g?nica de marcadores espec?ficos (tnf-? e cox-2) em enc?falo, cora??o, rim e intestino e contagem diferencial de c?lulas do sistema imune. A atividade e express?o da enzima ecto-5?-nucleotidase foi analisada no enc?falo, cora??o, rim e intestino dos animais controle e tratados. Para manter os animais no ?PET/CT foi realizada uma curva de concentra??o de anest?sico MS-222 (0.1, 0. 12, 0.15 g/L) e determinado um aparato para manter o peixe na presen?a de ?gua mas, ainda im?vel. Uma curva de tempo ap?s a inje??o de 18F-FDG foi realizada para a obten??o de imagens em ?PET/CT (0, 10, 20 e 30 min) e para a padroniza??o da quantifica??o de radia??o em um Gamma counter (15, 30, 60, 90 e 120 min). A exposi??o ao LPS foi capaz de aumentar a express?o de tnf-? em quase todos os tecidos estudados (cora??o, rim e intestino) e de cox-2 no rim. O n?mero de c?lulas brancas ativas do sangue perif?rico tamb?m foi aumentado, confirmando a indu??o da resposta inflamat?ria. A hidr?lise de AMP em animais injetados com LPS foi aumentada no cora??o em 24 hpi [72% em rela??o ao controle] com nenhuma altera??o na express?o g?nica da ecto-5?-nucleotidase. A express?o g?nica do ecto-5?-nucleotidase foi ajustada temporalmente no rim e intestino sem altera??o da atividade enzim?tica. Ap?s a padroniza??o de imagens com ?PET/CT e da quantifica??o de radia??o por Gamma counter para cada ?rg?o analisado, definiu-se 30 min como o melhor tempo para a biodistribui??o do 18F-FDG. Ap?s a aquisi??o de imagens em ?PET de animais inflamados n?o se identificou altera??es na capta??o do 18F-FDG comparado com o controle. A quantifica??o tecidual de radia??o registrou uma queda nas amostras de ossos nos animais tratados com LPS, embora os demais tecidos n?o tenham sido alterados. Estes dados indicam que o zebrafish responde ao LPS alterando express?o g?nica de marcadores espec?ficos, especialmente no rim e ativando c?lulas brancas do sangue. A inflama??o induzida parece estar acompanhada por um t?nue ajuste tecido-espec?fico da atividade e express?o da ecto-5?-nucleotidase em resposta ao processo inflamat?rio. Ainda que a inflama??o tenha sido confirmada, o registro de imagens por ?PET e a determina??o de radia??o nos diferentes tecidos n?o foram capazes de registrar diferen?as na atividade metab?lica em animais tratados com LPS. Entretanto, a padroniza??o destas t?cnicas oferece um avan?o no uso de radiof?rmacos em animais de pequeno porte, como o zebrafish.",
 	publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Faculdade de Bioci?ncias}
}