@PHDTHESIS{ 2015:247486903, title = {Estudo de glic?dios de Angiostrongylus cantonensis e o papel no imunodiagn?stico}, year = {2015}, url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/6711", abstract = "Angiostrongylus cantonensis ? um nemat?deo parasita, principal agente etiol?gico da meningite eosinof?lica (ME) em humanos, doen?a end?mica em diversos pa?ses tropicais e subtropicais. A ME se caracteriza pela eosinofilia >10% no l?quor, e hist?rico de ingest?o de moluscos crus, j? que estes s?o hospedeiros intermedi?rios do Angiostrongylus. O diagn?stico definitivo ? raramente poss?vel atrav?s da visualiza??o da larva no liquor. Testes sorol?gicos envolvendo principalmente a detec??o do componente de 31-kDa, que apresenta alta sensibilidade e especificidade, tem sido empregados como uma alternativa diagn?stica. O ant?geno de 31-kDa ? composto por glicoprote?nas e tentativas em produzi-lo de maneira recombinante, em modelos procari?ticos ou eucari?ticos, n?o tiveram sucesso em manter o reconhecimento imunol?gico, provavelmente pela incorreta ou insuficiente glicosila??o das mol?culas. Devido ? falta de informa??o sobre glic?dios de A. cantonensis e a necessidade de produzir um ant?geno padr?o capaz de ser usado em um teste de diagn?stico para distribui??o mundial, o objetivo principal deste trabalho foi estudar o perfil glic?dico de A. cantonensis e o papel dessas mol?culas no imunodiagn?stico da ME. Foram utilizados extratos sol?veis totais (ET) de vermes adultos machos e f?meas e produtos de excre??o e secre??o (ES) como fontes dos glic?dios e glicoconjugados estudados. Os N-glic?dios e glicoconjugados do ET de verme f?mea de A. cantonensis e o ant?geno de 31-kDa foram analisados e identificados por espectrometria de massa (EM) e lectina array, e a import?ncia imunog?nica destas mol?culas foi caracterizada por tratamento com glicosidases aliado a dot blot ou Western blot. Al?m disso, foi investigada a presen?a de enzimas envolvidas na s?ntese de diferentes glic?dios a partir de an?lises in silico do genoma e transcriptoma do Angiostrongylus. Diversos N-glic?dios foram identificados nas amostras analisadas. Estes continham estruturas complexas, com antenas truncadas contendo galactose e N-acetilgalactosamina em posi??es terminais e n?cleo ?1-6 fucosilado. As mesmas estruturas terminais foram identificadas pela an?lise de Lectin Array. Em rela??o a an?lise in s?lico da bioss?ntese de glic?dios em Angiostrongylus, foram identificados oito genes envolvidos na s?ntese de N-glic?dios, entre eles GCS1; GANAB, MAN1, MGAT2 e FUT8; e pelo menos tr?s genes envolvidos na s?ntese de O-glic?dios, GALNT, C1GALT1 e OFUT1. Os N-glic?dios se mostraram essenciais para a imunogenicidade do ant?geno de 31-kDa quando soros positivos para A. cantonensis foram testados. Uma modelagem in silico dos componentes de 31-kDa, demonstrou s?tios de glicosila??o para N-glic?dios, e previu as mesmas estruturas que foram identificadas por EM. Em conjunto, os dados gerados neste estudo mostraram a import?ncia de glic?dios para o diagn?stico de angiostrongil?ases e tamb?m o repert?rio de glic?dios que este parasito pode produzir. Este trabalho ? uma contribui??o importante para o desenvolvimento de um diagn?stico padr?o para a ME e tamb?m para novas perspectivas no estudo do diagn?stico de angiostrongil?ases, biologia do parasito e rela??o parasito-hospedeiro.", publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular}, note = {Faculdade de Bioci?ncias} }