@PHDTHESIS{ 2013:2100242029,
 	title = {A enzima hidrolase de nucleos?deos pur?nicos de Mycobacterium tuberculosis H37RV : caracteriza??o bioqu?mica, termodin?mica e estudos de nocaute g?nico},
 	year = {2013},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/5473",
 	abstract = "A tuberculose humana (TB) ? considerada uma amea?a ? sa?de global. O aumento na preval?ncia da doen?a, a emerg?ncia de cepas resistentes e a coinfec??o com o v?rus da imunodefici?ncia humana levaram ? urgente necessidade do desenvolvimento de novas drogas mais eficientes para o combate do agente causativo da TB, Mycobacterium tuberculosis. Al?m disso, h? a necessidade de novas drogas contra a micobact?ria nos seus diferentes estados fisiol?gicos, incluindo a TB latente. Um maior entendimento sobre as vias metab?licas de nucleot?deos do bacilo da TB, em particular as vias de salvamento de purinas e pirimidinas, levariam ao desenvolvimento de novas estrat?gias terap?uticas para controlar a incid?ncia global de TB. A hidrolase de nucleos?deos catalisa a hidr?lise irrevers?vel da liga??o N-glicos?dica de ribonucleos?deos, dando origem ? α-D-ribose e sua base livre correspondente. Este trabalho descreve a amplifica??o e clonagem do gene iunH, e a express?o e purifica??o da enzima recombinante hidrolase de nucleos?deos pur?nicos de M. tuberculosis (MtIAGU-NH). Os resultados de cin?tica no estado estacion?rio mostram que a MtIAGU-NH possui uma ampla especificidade pelos substratos, utilizando inosina, adenosina, guanosina e uridina como substratos. As medidas cin?ticas da liga??o da ribose ? MtIAGU-NH por espectroscopia fluorim?trica sugerem a exist?ncia de duas formas da enzima em equil?brio, relacionadas ? associa??o ao ligante. As concentra??es intracelulares de inosina, uridina, hipoxantina e uracil foram determinadas e os par?metros termodin?micos, estimados. Os par?metros termodin?micos de ativa??o (Ea, ΔG#, ΔS#, ΔH#) para a rea??o qu?mica catalisada pela MtIAGU-NH, al?m dos resultados de espectrometria de massa, calorimetria de titula??o isot?rmica, experimento de perfil de pH, alinhamento de m?ltiplas sequ?ncias e experimentos de docagem molecular tamb?m s?o apresentados neste trabalho. O nocaute do gene iunH mostrou que este n?o ? essencial para o crescimento do bacilo M. tuberculosis H37Rv nas condi??es experimentais empregadas. Os resultados aqui descritos dever?o ser ?teis para um melhor entendimento sobre a enzima MtIAGU-NH, fornecendo bases s?lidas para o desenvolvimento de estrat?gias terap?uticas e preventivas para diminuir a incid?ncia global da TB.",
 	publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Faculdade de Bioci?ncias}
}