@PHDTHESIS{ 2012:1094789698,
 	title = {Detec??o e quantifica??o de c?lulas vi?veis de Bacillus sporothermodurans e de Bacillus cereus em leite atrav?s de PCR convencional e de PCR em tempo real associadas ao prop?dio monoazida},
 	year = {2012},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/5453",
 	abstract = "A presen?a de Bacillus spp. em leite representa um importante problema para a ind?stria de latic?nios devido ? sua capacidade de esporula??o e ? possibilidade de resist?ncia do esporo ao tratamento t?rmico por ultra alta temperatura (UAT). O Bacillus sporothermodurans sobrevive ao sistema UHT, germinando e se multiplicando no leite estocado e, caso n?o seja corretamente quantificado e identificado, pode ultrapassar o limite estabelecido pela legisla??o para microrganismos mes?filos aer?bios, al?m de alterar a qualidade dos produtos l?cteos quando em altas concentra??es. Por outro lado, a contamina??o de leite por Bacillus cereus constitui n?o somente uma importante causa de deteriora??o, mas tamb?m est? associada com a ocorr?ncia das s?ndromes em?tica e diarreica. Tradicionalmente, estes microrganismos s?o identificados e quantificados em alimentos atrav?s de t?cnicas cl?ssicas de cultivo, mas m?todos baseados na Rea??o em Cadeia pela Polimerase (PCR) tamb?m t?m sido amplamente utilizados. Entretanto, a PCR n?o distingue c?lulas mortas de c?lulas vi?veis, o que pode ser contornado com o emprego de intercalantes de DNA, como o prop?dio monoazida (PMA). O PMA se liga ao DNA derivado de c?lulas com membranas rompidas, impedindo suas amplifica??es na PCR, permitindo, assim, a detec??o seletiva de c?lulas vi?veis. Portanto, a presente tese teve por objetivo caracterizar a resist?ncia t?rmica de B. sporothermodurans, bem como desenvolver m?todos de detec??o e quantifica??o de c?lulas vi?veis de B. sporothermodurans e de B. cereus em amostras de leite atrav?s de PCR associada ao PMA. Tratamentos isot?rmicos e n?o isot?rmicos permitiram a determina??o do perfil de resist?ncia t?rmica de esporos de B. sporothermodurans ao processo UHT, predizendo que a 121?C foi encontrado um valor D entre 2 a 4 min.A detec??o e quantifica??o seletivas de B. sporothermodurans e de B. cereus atrav?s de PMA-qPCR foram desenvolvidas utilizando o gene RNAr 16S e o gene da hemolisina como alvos, respectivamente. O tratamento com PMA a partir de cultura pura e leite UHT artificialmente contaminado foi padronizado atrav?s da PCR convencional para a detec??o de c?lulas vi?veis destes microrganismos. A inibi??o da amplifica??o de DNA de c?lulas mortas foi obtida na concentra??o de 30μg/mL de PMA. A padroniza??o dos ensaios de qPCR foram realizados utilizando sondas de hidr?lise (sistema TaqMan?) espec?ficas para cada gene alvo. O limite de quantifica??o a partir de leite UHT artificialmente contaminado foi de 2,2 x 102 UFC/mL para B. sporothermodurans e de 7,5 x 102 UFC/mL para B. cereus. As t?cnicas foram aplicadas a 135 amostras de leite UHT de diferentes marcas comerciais, comparando com a metodologia cl?ssica de cultivo para cada microrganismo. B. sporothermodurans e B. cereus foram, respectivamente, detectados em 14 (10,4%) e 44 (32,6%) das amostras analisadas pelos m?todos moleculares desenvolvidos, e em 11 (8,1%) e 15 (11,1%) pelos m?todos convencionais de cultivo. Os m?todos de PMA-qPCR desenvolvidos neste estudo foram espec?ficos e sens?veis para a detec??o e quantifica??o de c?lulas vi?veis de B. sporothermodurans e de B. cereus, mostrando-se aplic?veis para serem utilizados na avalia??o de amostras de leite, reduzindo o tempo de an?lise deste produto. Al?m disso, os resultados demonstraram que B. cereus pode ser encontrado em leite tratado pelo sistema de UHT",
 	publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Faculdade de Bioci?ncias}
}