@PHDTHESIS{ 2011:1434496691, title = {Estudo de prote?nas de Angiostrongylus cantonensis para o entendimento da rela??o parasito-hospedeiro e an?lise de alvos para o diagn?stico das angiostrongil?ases}, year = {2011}, url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/225", abstract = "O g?nero Angiostrongylus Kamensky, 1905 agrupa animais pertencentes ao filo Nematoda, cuja caracter?stica marcante ? a forma corporal cil?ndrica. Duas esp?cies possuem import?ncia m?dica: A. costaricensis cujo habitat natural s?o as art?rias mesent?ricas de camundongos silvestres e na infec??o humana pode levar ao desenvolvimento de angiostrongil?ase abdominal; e A. cantonensis que habita as art?rias pulmonares de roedores e na infec??o humana pode causar meningoencefalite eosinof?lica. O diagn?stico de ambas as doen?as ? dificultado pela aus?ncia de formas parasit?rias nas fezes, no caso de infec??es por A. costaricensis e raramente encontradas no l?quido cefaloraquidiano no caso de meningoencefalite eosinof?lica. Muitos estudos v?m sendo desenvolvidos para o aprimoramento da detec??o das angiostrongil?ases visando testes que sejam capazes de discernir das diferentes infec??es parasit?rias de forma sens?vel e espec?fica. O ant?geno de 31kDa ? considerado atualmente o principal ant?geno para o diagn?stico da meningoencefalite eosinof?lica, causada por A. cantonensis, entretanto ? proveniente da purifica??o de extratos brutos do parasito o que acarreta num processo laborioso e dispendioso que em ?ltima an?lise gera quantidades insuficientes para que haja ampla distribui??o e compartilhamento entre os centros de diagn?stico. Com o intuito de aprimorar o diagn?stico sorol?gico das angiostrongil?ases e tornar os ant?genos dispon?veis globalmente o presente trabalho buscou identificar novos alvos antig?nicos e caracterizar o ant?geno de 31kDa para posterior propaga??o de formas recombinantes. Al?m disso, foram estudadas mol?culas que podem ser fundamentais na manuten??o do parasitismo, que futuramente poder?o ser alvos para o tratamento das angiostrongil?ases. Duas fontes de ant?genos a partir de vermes adultos f?meas foram empregadas: produtos de excre??o e secre??o (ES) e extrato bruto (TE). Nos ES foi detectada a atividade de enzimas antioxidantes como catalase e super?xido dismutase e identificadas, por western blot e espectrometria de massas (MS), 17 prote?nas alvo para o diagn?stico e tratamento das angiostrongil?ases dentre elas hemoglobinases, prote?nas de choque t?rmico e inibidores de proteases. Nas amostras de TE al?m da identifica??o de enzimas antioxidantes, estavam presentes glutationas transferases (GST), outra classe de enzimas de defesa. Estas prote?nas foram purificadas por cromatografia de afinidade e analisadas por MS o que revelou sequencias pept?dicas hom?logas a GST de classe sigma. Em TE tamb?m foi poss?vel a caracteriza??o do ant?geno de 31kDa que quando submetido a eletroforese bidimensional mostrou-se ser composto por 4 spots com ponto isoel?trico (pI) em torno de 4,5 sendo reconhecidos pelo soro de pacientes infectados com Angiostrongylus spp. Os spots foram analisados por MS e tr?s diferentes prote?nas foram identificadas: 14-3-3; prote?na com dom?nio NAC e a subunidade ?psilon do coatamero. O ant?geno de 31kDa foi caracterizado como uma glicoprote?na atrav?s de estudos de oxida??o de glic?deos, onde se observou que a antigenicidade dos 4 spots foi dependente de res?duos de a??car. As sequ?ncias de DNA dos ant?genos foram obtidas pelo sequenciamento aleat?rio do genoma pela plataforma 454 (Roche) e depositadas no Genbank. Os dados gerados no presente trabalho contribuem de forma significativa para o desenvolvimento de ant?genos recombinantes que poder?o ser amplamente distribu?dos para valida??o e aplica??o em diagn?stico", publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Zoologia}, note = {Faculdade de Bioci?ncias} }