@PHDTHESIS{ 2022:437163913, title = {An?lise do efeito do metabolito da an?lise do efeito do metabolito da microbiota acetato de s?dio frente a infec??o pelo v?rus SARS-COV-2 utilizando metodologia de Lamp}, year = {2022}, url = "https://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/10556", abstract = "A r?pida dissemina??o mundial da infec??o pelo v?rus da s?ndrome respirat?ria aguda grave (SARS-CoV-2) foi um desafio para a ci?ncia, at? que haja uma implementa??o efetiva do programa de vacina??o, uma estrat?gia robusta de testes, juntamente com medidas de preven??o, continuar? sendo a melhor escolha e mais vi?vel para o controle da propaga??o da doen?a, portanto verificou-se a necessidade de novos m?todos de detec??o. A microbiota intestinal tem como o produto ?cidos graxos de cadeia curta, um deles ? o acetato, ele protege camundongos contra a infec??o pela cepa VSR. No entanto, o papel do acetato na infec??o por SARS-CoV-2 ? desconhecido. Muitos m?todos para detec??o de ?cido ribonucleico SARSCoV-2 foram desenvolvidos. O padr?o-ouro para detec??o de RNA ? a PCR quantitativa de transcri??o reversa (RT-qPCR), exigindo equipamento especializado de disponibilidade limitada em muitos contextos. Por outro lado, existem t?cnicas que s?o cada vez mais apreciados como adequados para testes no local de atendimento, entre eles, o LAMP (amplifica??o isot?rmica mediada por loop) que devido ? sua simplicidade intr?nseca e alta sensibilidade possuem uma abordagem atraente. Portanto o estudo tem como objetivo: Testar os efeitos do acetato de s?dio no controle da infec??o pelo SARS-CoV-2 in vitro e analisar os resultados utilizando duas metodologias moleculares. A metodologia utilizada no estudo inclui: c?lulas foram pr? tratadas com 200 ?M ou 400 ?M de acetato por 24 h. As c?lulas foram infectadas com 0,1 multiplicidade de infec??o (MOI) de SARS-CoV-2 por mais 24 h ou 4 dias. As c?lulas foram colhidas para extra??o de RNA e s?ntese de cDNA e an?lise da express?o genica viral por PCR em tempo real. Para an?lise com outra metodologia molecular foi realizada a padroniza??o da metodologia de LAMP. Inicialmente foi feito a escolha da sequ?ncia dos iniciadores para dois genes de SARS-CoV-2. Os resultados foram confirmados atrav?s de gel de agarose, para a quantifica??o foi utilizado medidas de fluoresc?ncia em um espectrofot?metro. Os resultados mostraram que c?lulas pre-tratadas com acetato na concentra??o de 400 ?M apresentam menor positividade para SARS-CoV-2 amplificado por LAMP. Conclus?o: Nossos dados demonstram que ? poss?vel realizar um protocolo simples de LAMP para amplifica??o de genes do SARS-CoV-2.", publisher = {Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul}, scholl = {Programa de P?s-Gradua??o em Medicina/Pediatria e Sa?de da Crian?a}, note = {Escola de Medicina} }