@MASTERSTHESIS{ 2017:1413809587,
 	title = {Caracterização bioquímica da enzima Adenilosuccinato liase de Leishmania (Viannia) braziliensis visando o planejamento racional de fármacos antileishmanioses},
 	year = {2017},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/7755",
 	abstract = "A enzima Adenilosuccinato liase (ASL) pertence a superfamília de enzimas aspartase/fumarase, as quais compartilham o mecanismo catalítico ácido-básico com β-eliminação de fumarato como o produto comum. A ASL está envolvida tanto na biossíntese de novo quanto na via de salvamento de purinas. Aqui são descritos os métodos de clonagem, expressão e obtenção da proteína recombinante ASL de Leishmania braziliensis (LbASL) na sua forma homogênea. Análises da proteína recombinante por espectrometria de massa, determinação do estado oligomérico e alinhamento múltiplo de sequências também são apresentados. Ensaios de cinética em estado estacionário mostraram que a LbASL segue o perfil de Michaelis-Menten. Experimentos de titulação isotérmica por calorimetria sugerem que a LbASL segue um mecanismo cinético Uni-Bi ordenado, no qual o fumarato é liberado primeiro do sítio ativo seguido pelo AMP. Dados de velocidade iniciais para a reação reversa e a relação de Haldane permitiram calcular uma constante de equilíbrio desfavorável para a reação química catalisada pela enzima. Os parâmetros de energia de ativação e termodinâmica também foram estimados. Os efeitos isotópicos do solvente V/K e V sugerem uma modesta contribuição da transferência de prótons do solvente durante o passo limitante da reação. Os dados obtidos no inventário de prótons mostram um modesto efeito em V resultante de um único sítio protônico, e o valor de transição do fator de estado de fracionamento de 0,74 sugere a participação da transferência de prótons do solvente em vibrações de estado de transição perpendiculares à coordenada da reação. Experimentos de perfil de pH para kcat e kcat/KM sugerem os resíduos de aminoácidos envolvidos, respectivamente, na catálise e ligação do substrato. A modelagem molecular para LbASL foi realizada visando prover uma base estrutural para interpretação dos dados experimentais. Um melhor entendimento do modo de ação da LbASL será útil para o desenho racional de agentes antileishmanioses.",
 	publisher = {Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Faculdade de Biociências}
}