@PHDTHESIS{ 2017:638017931,
 	title = {Avaliação do fenótipo de persistência em isolados nasocomiais de Acinetobacter calcoaceticus-baumannii},
 	year = {2017},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/7566",
 	abstract = "Os patógenos pertencentes ao complexo Acinetobacter calcoaceticus-baumannii (ACB)
 são considerados oportunistas e emergentes, responsáveis por ocasionar diversas
 enfermidades, acometendo principalmente pacientes imunocomprometidos e internados
 em unidades de tratamento intensivo. As opções terapêuticas para o tratamento de
 infecções ocasionadas por estes patógenos são restritas, uma vez que estes apresentam
 frequentemente resistência à maioria dos antimicrobianos. Além disso, essas bactérias
 podem ainda formar células persisters, que constituem uma pequena população de
 células suscetíveis capazes de tolerar concentrações letais de antimicrobianos
 bactericidas e outros agentes estressores. Este fenótipo está associado a falhas na terapia
 antimicrobiana, especialmente nas infecções crônicas e recorrentes. Desta forma, o
 objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de células persisters formadas por isolados
 do complexo ACB frente à exposição ao meropenem e/ou à polimixina B, na condição
 de biofilme e em cultivo planctônico, assim como analisar estas células
 morfologicamente e identificar padrões de expressão de proteínas que pudessem estar
 envolvidos na formação e manutenção da persistência. Para tanto, 20 isolados clínicos
 foram caracterizados quanto à capacidade em formar biofilme em superfície de
 poliestireno, e à suscetibilidade ao meropenem e à polimixina B, que foi avaliada por
 meio da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) a estes fármacos.
 Todos os isolados foram submetidos à exposição ao meropenem em diferentes
 concentrações acima da CIM, enquanto que cinco foram expostos à polimixina B para a
 avaliação da presença de células persisters. Para todos os experimentos, a fim de
 estimar a fração de células remanescentes, alíquotas foram removidas em tempos
 determinados, efetuando-se diluições decimais seriadas e semeadura pela técnica da
 gota em ágar nutriente. Células persisters, em diferentes frações, foram encontradas nos
 cultivos de todos os isolados, tanto em biofilmes como na condição planctônica, após a
 exposição por 48 h ao meropenem e à polimixina B, sendo as frações mais elevadas
 encontradas na condição de biofilme para ambos os antimicrobianos. As diferentes
 concentrações de meropenem avaliadas não influenciaram os níveis de células
 persisters; entretanto, frente à exposição à polimixina B, a fração de células mostrou-se
 dependente da concentração empregada. Após exposição à polimixina B por 24 h, foi
 observada retomada de crescimento das células sobreviventes, que foram avaliadas
 novamente quanto à suscetibilidade a este antimicrobiano, mantendo-se suscetíveis com CIM de 1 μg/mL, bem como foi verificada a integridade do antimicrobiano no
 sobrenadante destes cultivos por ensaios cromatográficos, demonstrando que o mesmo
 não sofre degradação após 48 h de exposição. Entretanto, quando se associou
 meropenem à polimixina B em diferentes concentrações, além de não ter sido observada
 a retomada de crescimento das células remanescentes, ocorreu a erradicação das células
 persisters de um isolado de A. baumannii (Acb-1) cultivado em fase exponencial tardia.
 Além disso, a técnica de Nano-Cromatografia Líquida acoplada à Espectrometria de
 Massas em Tandem foi empregada para a identificação e quantificação relativa de
 proteínas possivelmente associadas à persistência em A. baumannii, após a exposição ao
 meropenem. Diferentes padrões de expressão foram identificados entre as células
 persisters presentes em cultivo planctônico e em biofilme, sugerindo que a regulação da
 persistência possa ser realizada por mecanismos diferentes. Observou-se expressão
 aumentada de proteínas envolvidas nos processos de divisão celular e replicação de
 DNA, especialmente no cultivo planctônico, em concordância com a presença de
 divisão celular observada nas imagens obtidas a partir da microscopia eletrônica de
 varredura nesta condição de cultivo. O aumento de expressão da glicose desidrogenase
 (GDH), NADH desidrogenase (NDH-1), succinato desidrogenase e ATP sintase
 indicam a transferência de elétrons a partir da reação catalisada por GDH para a cadeia
 de transporte de elétrons como uma possível fonte de energética para as persisters,
 corroborando a observação da presença de divisão celular observada no cultivo
 planctônico. Em contraste, proteínas envolvidas no metabolismo de aminoácidos, bem
 como os principais fatores de elongação apresentaram expressão diminuída em células
 persisters de Acb-1, sugerindo que a síntese proteica esteja reduzida, mesmo que muitas
 proteínas tenham sido identificadas com expressão aumentada. Muitas proteínas
 relacionadas à membrana apresentaram a sua expressão aumentada, indicando possíveis
 alterações em sua composição e função, embora proteínas relacionadas ao metabolismo
 de lipídeos tenham apresentado expressão diminuída. A análise proteômica das células
 persisters, sobretudo, mostrou que estas células podem ser fisiologicamente distintas
 quando cultivadas em condições diferentes, bem como ao longo do tempo em uma
 mesma condição. Desta forma, considerando os distintos comportamentos do Acb-1
 quando exposto isoladamente ao meropenem ou à polimixina B, bem como quando
 exposto a estes fármacos ao mesmo tempo, pode-se concluir que cada antimicrobiano
 pode ter atuado como um diferente estressor, possivelmente, levando a e/ou selecionando mecanismos de tolerância diferentes entre as persisters, o que possibilitou
 a sua erradicação quando os fármacos foram combinados.",
 	publisher = {Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Faculdade de Biociências}
}