@MASTERSTHESIS{ 2016:211379613,
 	title = {Estudo do papel da ecto-5'-nucleotidase no contexto da inflamação avaliando parâmetros citológicos, bioquímicos, moleculares e imagens de μPET/CT em Zebrafish},
 	year = {2016},
 	url = "http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/6927",
 	abstract = "O mecanismo de ação do LPS ainda não é completamente elucidado em vertebrados como os peixes, e se diferencia dos vertebrados superiores. Em zebrafish, o LPS é capaz de aumentar o recrutamento de células imunes e a expressão de genes relacionados com a resposta imune. O sistema purinérgico tem uma grande relação com a regulação do sistema imune e as respostas inflamatórias. O ATP é um nucleotídeo importante na secreção de citocinas e no recrutamento e diferenciação de células imunes, podendo ser sequencialmente desfosforilado gerando adenosina. No contexto da inflamação, a adenosina atua como uma molécula imunomodulatória inata. Participam do controle dos níveis extracelulares da adenosina, os transportadores de nucleosídeos e a ecto-5’-nucleotidase. A ecto-5’-nucleotidase é uma enzima com papel de marcapasso na produção de adenosina e constitui um dos focos do presente estudo. Considerando a contribuição da abordagem de análise de imagens no contexto do estudo da inflamação, é sabido que a captação do radiofármaco 18F-FDG, um análogo da glicoseestá aumentada em roedores submetidos à inflamação, o que gera uma imagem diferenciada. O micro Tomógrafo por Emissão de Pósitron/Tomografia Computadorizada (μPET/CT) é utilizado para pesquisas em animais de pequeno porte e obtém imagens utilizando um radiofármaco. O uso da μPET/CT contribui com informações a nível molecular, funcional e estrutural em tempo real e permite acompanhar o efeito de fármacos em situações fisiológicas/patológicas na escala de um animal diminuto como o zebrafish. A tecnologia do μPET/CT é relativamente nova e até o momento não existem estudos científicos publicados aplicando radiofármacos em zebrafish. Neste contexto, o objetivo do projeto foi estudar o envolvimento da enzima ecto-5’-nucleotidase no desenvolvimento de inflamação induzida por LPS utilizando-se de parâmetros citológicos, bioquímicos, moleculares e de imagem por μPET em diferentes tecidos de zebrafish adulto (Danio rerio). Para induzir inflamação no zebrafish, os animais foram injetados com uma solução de LPS (10 μg/g de peso corporal; i.p) após terem sido submetidos à anestesia (tricaína 0.1 g/L). Os animais permaneceram por 2 h ou 24 h neste tratamento. Para confirmação da inflamação foram analisadas a expressão gênica de marcadores específicos (tnf-α e cox-2) em encéfalo, coração, rim e intestino e contagem diferencial de células do sistema imune. A atividade e expressão da enzima ecto-5’-nucleotidase foi analisada no encéfalo, coração, rim e intestino dos animais controle e tratados. Para manter os animais no μPET/CT foi realizada uma curva de concentração de anestésico MS-222 (0.1, 0. 12, 0.15 g/L) e determinado um aparato para manter o peixe na presença de água mas, ainda imóvel. Uma curva de tempo após a injeção de 18F-FDG foi realizada para a obtenção de imagens em μPET/CT (0, 10, 20 e 30 min) e para a padronização da quantificação de radiação em um Gamma counter (15, 30, 60, 90 e 120 min). A exposição ao LPS foi capaz de aumentar a expressão de tnf-α em quase todos os tecidos estudados (coração, rim e intestino) e de cox-2 no rim. O número de células brancas ativas do sangue periférico também foi aumentado, confirmando a indução da resposta inflamatória. A hidrólise de AMP em animais injetados com LPS foi aumentada no coração em 24 hpi [72% em relação ao controle] com nenhuma alteração na expressão gênica da ecto-5’-nucleotidase. A expressão gênica do ecto-5’-nucleotidase foi ajustada temporalmente no rim e intestino sem alteração da atividade enzimática. Após a padronização de imagens com μPET/CT e da quantificação de radiação por Gamma counter para cada órgão analisado, definiu-se 30 min como o melhor tempo para a biodistribuição do 18F-FDG. Após a aquisição de imagens em μPET de animais inflamados não se identificou alterações na captação do 18F-FDG comparado com o controle. A quantificação tecidual de radiação registrou uma queda nas amostras de ossos nos animais tratados com LPS, embora os demais tecidos não tenham sido alterados. Estes dados indicam que o zebrafish responde ao LPS alterando expressão gênica de marcadores específicos, especialmente no rim e ativando células brancas do sangue. A inflamação induzida parece estar acompanhada por um tênue ajuste tecido-específico da atividade e expressão da ecto-5’-nucleotidase em resposta ao processo inflamatório. Ainda que a inflamação tenha sido confirmada, o registro de imagens por μPET e a determinação de radiação nos diferentes tecidos não foram capazes de registrar diferenças na atividade metabólica em animais tratados com LPS. Entretanto, a padronização destas técnicas oferece um avanço no uso de radiofármacos em animais de pequeno porte, como o zebrafish.",
 	publisher = {Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular},
 	note = {Faculdade de Biociências}
}