@PHDTHESIS{ 2022:351046709, title = {Análise do efeito do metabolito da análise do efeito do metabolito da microbiota acetato de sódio frente a infecção pelo vírus SARS-COV-2 utilizando metodologia de Lamp}, year = {2022}, url = "https://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/10556", abstract = "A rápida disseminação mundial da infecção pelo vírus da síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2) foi um desafio para a ciência, até que haja uma implementação efetiva do programa de vacinação, uma estratégia robusta de testes, juntamente com medidas de prevenção, continuará sendo a melhor escolha e mais viável para o controle da propagação da doença, portanto verificou-se a necessidade de novos métodos de detecção. A microbiota intestinal tem como o produto ácidos graxos de cadeia curta, um deles é o acetato, ele protege camundongos contra a infecção pela cepa VSR. No entanto, o papel do acetato na infecção por SARS-CoV-2 é desconhecido. Muitos métodos para detecção de ácido ribonucleico SARSCoV-2 foram desenvolvidos. O padrão-ouro para detecção de RNA é a PCR quantitativa de transcrição reversa (RT-qPCR), exigindo equipamento especializado de disponibilidade limitada em muitos contextos. Por outro lado, existem técnicas que são cada vez mais apreciados como adequados para testes no local de atendimento, entre eles, o LAMP (amplificação isotérmica mediada por loop) que devido à sua simplicidade intrínseca e alta sensibilidade possuem uma abordagem atraente. Portanto o estudo tem como objetivo: Testar os efeitos do acetato de sódio no controle da infecção pelo SARS-CoV-2 in vitro e analisar os resultados utilizando duas metodologias moleculares. A metodologia utilizada no estudo inclui: células foram pré tratadas com 200 µM ou 400 µM de acetato por 24 h. As células foram infectadas com 0,1 multiplicidade de infecção (MOI) de SARS-CoV-2 por mais 24 h ou 4 dias. As células foram colhidas para extração de RNA e síntese de cDNA e análise da expressão genica viral por PCR em tempo real. Para análise com outra metodologia molecular foi realizada a padronização da metodologia de LAMP. Inicialmente foi feito a escolha da sequência dos iniciadores para dois genes de SARS-CoV-2. Os resultados foram confirmados através de gel de agarose, para a quantificação foi utilizado medidas de fluorescência em um espectrofotômetro. Os resultados mostraram que células pre-tratadas com acetato na concentração de 400 µM apresentam menor positividade para SARS-CoV-2 amplificado por LAMP. Conclusão: Nossos dados demonstram que é possível realizar um protocolo simples de LAMP para amplificação de genes do SARS-CoV-2.", publisher = {Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul}, scholl = {Programa de Pós-Graduação em Medicina/Pediatria e Saúde da Criança}, note = {Escola de Medicina} }