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dc.creatorGianniotis, Ekaterini-
dc.creator.Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4569022E6por
dc.contributor.advisor1Bogo, Maurício Reis-
dc.contributor.advisor1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782767J9por
dc.date.accessioned2015-04-14T14:50:53Z-
dc.date.available2008-11-26-
dc.date.issued2008-10-31-
dc.identifier.citationGIANNIOTIS, Ekaterini. Expressão e purificação do domínio Ets do fator de transcrição Spi-C humano recombinante : ensaios de ligação a promotores de linfócitos B. 2008. 59 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Molecular) - Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, 2008.por
dc.identifier.urihttp://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/5327-
dc.description.resumoOs membros da família de fatores de transcrição Ets contêm um domínio de ligação ao DNA, chamado domínio Ets, que reconhece uma seqüência rica em purinas, cujo consenso central é formado pela seqüência 5 -GGAA/T-3 . O domínio Ets pode ser produzido como um fragmento de proteína que se enovela independentemente, numa estrutura estável, sendo suficiente para que ocorra ligação ao DNA. A proteína Spi-C pertence à subfamília Spi e se caracteriza por ser expressa durante diferentes estágios do desenvolvimento de células B e em macrófagos. Existem alguns trabalhos publicados que descrevem o reconhecimento por Spi-C de algumas seqüências de DNA, previamente estudadas para a proteína PU.1, membro da mesma subfamília. A expressão de Spi-C sobrepõem-se com a de PU.1 ao longo do desenvolvimento das células B. Existem promotores de genes envolvidos no desenvolvimento de células B que contêm sítios para a ligação de proteínas Ets. Estudos quanto à ligação da Spi-C nos mesmos podem contribuir para acrescentar dados sobre a função desse fator de transcrição e sobre a regulação da transcrição desses genes. Neste trabalho, apresentamos a construção do gene, a expressão heteróloga do domínio Ets da proteína Spi-C humana em Escherichia coli e a sua purificação por FPLC com rendimento de aproximadamente 0,7mg de proteína por grama de célula. Com o objetivo de investigar novas seqüências promotoras alvo para Spi-C, foram realizados estudos de ligação a seqüências de DNA localizadas nos promotores dos genes que codificam para a subunidade do receptor de IL-7 e para a proteína transmembrana integrante do complexo receptor de células B, Igα. Estas proteínas participam do desenvolvimento de células B e são essenciais para a seleção das mesmas na medula óssea. Nossos resultados demonstram que o domínio Ets de Spi-C reconhece e se liga a essas seqüências de DNA (migração em gel) formando complexos de diferentes tamanhos. O domínio Ets foi capaz de se ligar a seqüências de DNA in vitro numa proporção maior do que 1:1 sendo que, quanto maior a concentração do domínio maior foi o retardo do DNA no gel. Surpreendentemente, o domínio Ets não foi capaz de discriminar as seqüências selvagens, daquelas com mutações no consenso central de ligação, mantendo o mesmo perfil de retardo das bandas, sugerindo que o restante da proteína é importante para esse reconhecimentopor
dc.description.provenanceMade available in DSpace on 2015-04-14T14:50:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 407199.pdf: 845549 bytes, checksum: 784dbc7e1ff6bea98489f021081c2769 (MD5) Previous issue date: 2008-10-31eng
dc.formatapplication/pdfpor
dc.thumbnail.urlhttp://tede2.pucrs.br:80/tede2/retrieve/16233/407199.pdf.jpg*
dc.languageporpor
dc.publisherPontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sulpor
dc.publisher.departmentFaculdade de Biociênciaspor
dc.publisher.countryBRpor
dc.publisher.initialsPUCRSpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecularpor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subjectBIOLOGIA CELULARpor
dc.subjectBIOLOGIA MOLECULARpor
dc.subjectDNApor
dc.subjectPROTEÍNASpor
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERALpor
dc.titleExpressão e purificação do domínio Ets do fator de transcrição Spi-C humano recombinante : ensaios de ligação a promotores de linfócitos Bpor
dc.typeDissertaçãopor
Appears in Collections:Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular

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