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Document type: Dissertação
Title: Expressão e purificação do domínio Ets do fator de transcrição Spi-C humano recombinante : ensaios de ligação a promotores de linfócitos B
Author: Gianniotis, Ekaterini 
Advisor: Bogo, Maurício Reis
Abstract (native): Os membros da família de fatores de transcrição Ets contêm um domínio de ligação ao DNA, chamado domínio Ets, que reconhece uma seqüência rica em purinas, cujo consenso central é formado pela seqüência 5 -GGAA/T-3 . O domínio Ets pode ser produzido como um fragmento de proteína que se enovela independentemente, numa estrutura estável, sendo suficiente para que ocorra ligação ao DNA. A proteína Spi-C pertence à subfamília Spi e se caracteriza por ser expressa durante diferentes estágios do desenvolvimento de células B e em macrófagos. Existem alguns trabalhos publicados que descrevem o reconhecimento por Spi-C de algumas seqüências de DNA, previamente estudadas para a proteína PU.1, membro da mesma subfamília. A expressão de Spi-C sobrepõem-se com a de PU.1 ao longo do desenvolvimento das células B. Existem promotores de genes envolvidos no desenvolvimento de células B que contêm sítios para a ligação de proteínas Ets. Estudos quanto à ligação da Spi-C nos mesmos podem contribuir para acrescentar dados sobre a função desse fator de transcrição e sobre a regulação da transcrição desses genes. Neste trabalho, apresentamos a construção do gene, a expressão heteróloga do domínio Ets da proteína Spi-C humana em Escherichia coli e a sua purificação por FPLC com rendimento de aproximadamente 0,7mg de proteína por grama de célula. Com o objetivo de investigar novas seqüências promotoras alvo para Spi-C, foram realizados estudos de ligação a seqüências de DNA localizadas nos promotores dos genes que codificam para a subunidade do receptor de IL-7 e para a proteína transmembrana integrante do complexo receptor de células B, Igα. Estas proteínas participam do desenvolvimento de células B e são essenciais para a seleção das mesmas na medula óssea. Nossos resultados demonstram que o domínio Ets de Spi-C reconhece e se liga a essas seqüências de DNA (migração em gel) formando complexos de diferentes tamanhos. O domínio Ets foi capaz de se ligar a seqüências de DNA in vitro numa proporção maior do que 1:1 sendo que, quanto maior a concentração do domínio maior foi o retardo do DNA no gel. Surpreendentemente, o domínio Ets não foi capaz de discriminar as seqüências selvagens, daquelas com mutações no consenso central de ligação, mantendo o mesmo perfil de retardo das bandas, sugerindo que o restante da proteína é importante para esse reconhecimento
Keywords: BIOLOGIA CELULAR
BIOLOGIA MOLECULAR
DNA
PROTEÍNAS
CNPQ Knowledge Areas: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL
Language: por
Country: BR
Publisher: Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul
Institution Acronym: PUCRS
Department: Faculdade de Biociências
Program: Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular
Citation: GIANNIOTIS, Ekaterini. Expressão e purificação do domínio Ets do fator de transcrição Spi-C humano recombinante : ensaios de ligação a promotores de linfócitos B. 2008. 59 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Celular e Molecular) - Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, 2008.
Access type: Acesso Aberto
URI: http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/5327
Issue Date: 31-Oct-2008
Appears in Collections:Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular

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